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細胞在體外進行培養(yǎng)時影響生長的幾點因素細胞在體外進行培養(yǎng),失去了機體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長.一、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細胞的生長.細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細胞代謝,但并無傷害作用.把細胞置于23~25℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減...
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什么時候需要穩(wěn)定細胞株？以下實驗，構(gòu)建穩(wěn)定細胞株而不是瞬時轉(zhuǎn)染更能滿足實驗要求：1)外源片段在分裂細胞中長期(2周)穩(wěn)定表達。雖然普通轉(zhuǎn)染實驗一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達效率，但腺病毒載體在多數(shù)分裂細胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達周期。而非分裂細胞，可以使用腺相關病毒載體轉(zhuǎn)導外源基因，因為腺相關病毒載體在許多非分裂細胞中可以保持長達1年的高效表達。2)需要構(gòu)建使用誘導表達系統(tǒng)，這主要是由于：a)過表達基因或者干擾目的基因引起細胞毒性或者抑制細胞生長等不利因素;b...
3-18
細胞培養(yǎng)注意事項（入門級）總的原則：無菌操作、保證細胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性按時間順序整理1、細胞房和生物安全柜（或超凈工作臺）先開紫外照射30min。作用：對環(huán)境滅菌（空氣）。（備注：如果著急，至少也要開15分鐘）在做實驗之前考慮好需要哪些物品。開始照射之前，將所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超凈工作臺）里面。常用移液槍或電動移液器等，需要在工作臺上放置一套設備。細胞培養(yǎng)箱一般都已經(jīng)調(diào)整好。定期留意一下二氧化碳是否足夠。不夠及時更換。2、顯微鏡需要定期消毒酒精擦拭。注意：顯微...
3-9
細胞養(yǎng)不好？那可能是這些沒注意到位1、購買的細胞死亡或存活率不佳可能原因？細胞冷凍管解凍后，為何會有細胞數(shù)目太少的情形？研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養(yǎng)溫度使用錯誤；細胞置于–80℃太久。研究人員在冷凍細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻...
2-25
細胞株在生物制藥中使用非常廣泛，細胞株培養(yǎng)條件簡單，貼壁強度適中，比較容易轉(zhuǎn)染，很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。細胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學物質(zhì)。細胞株的篩選我們要注意加藥時間以及維持濃度：1.由于基因轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)之后要一段時間才能表達出蛋白質(zhì)。所以細胞株篩選時不能太早;但是也不能太晚，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細胞所淹沒，終...
2-14
質(zhì)控菌株本質(zhì)上是標準菌株的商業(yè)衍生產(chǎn)品，其應有可靠的溯源證明追溯至其使用的標準菌株來源，在微生物實驗室僅可作為工作菌株進行使用，在使用前也應進行特性和純度的確認。質(zhì)控菌種基本上分為兩類：第一種滿足低濃度接種量的要求，細菌含量一般小于100cfu，這是各種微生物培養(yǎng)基促生長試驗、微生物陽性對照試驗的接種量要求，無菌工藝模擬試驗中培養(yǎng)基的靈敏度檢測、無菌或微生物限度檢查實驗方法驗證等。為了滿足高濃度接種的需要，其他種類的細菌含量一般為105-106cfu。是對防腐劑、抑菌劑、消毒...
1-16
結(jié)腸癌細胞株延伸出早期結(jié)腸癌治療方法結(jié)腸癌起病隱匿，早期的癥狀不是很明顯，主要有大便習慣改變、便次增多或無原因的粘液、膿血便、原因不明的低燒、盜汗、貧血等。出現(xiàn)結(jié)腸癌癥狀時要及時去醫(yī)院進行詳細的檢查。1965年科研人員將人結(jié)腸癌與胰腺癌組織中提取到r細胞膜糖蛋白，并發(fā)現(xiàn)也存在于內(nèi)胚層衍生的消化道腺癌及2-6個月胚胎肝、腸及胰腺組織中，故而命名為CEA，且認為屬于可特異地測定結(jié)腸癌，亦被后繼的工作證實。隨著腫瘤分子遺傳學的研究，體外基因擴增技術(shù)聚合酶鏈式反應(PCR)的發(fā)展與應...
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關于ATCC的細胞,你需要知道的那些事兒ATCC以生命科學領域*知識的獲取，分類，匯總，完善進而廣泛傳播為己任，以期為推動生物原料，生物信息，生物技術(shù)，知識產(chǎn)權(quán)，規(guī)范等相關領域的前沿性、合法化、實用性發(fā)揮一定的作用。ATCC擁有目前zui大的、品種zui豐富的微生物、細胞系以及重組DNA原料，同時它也是科研工作者*的提供可靠的研究材料的供應商。ATCC的成立可追溯到1925年，一個科學委員會認識到科學研究對于微生物的大量需求而萌發(fā)了創(chuàng)建一個微生物相關制品供應中心的想法。而今，...
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